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蛋白質(zhì)和酶的提取方法
更新時(shí)間:2022-11-30   點(diǎn)擊次數(shù):1435次

蛋白質(zhì)和酶的提取方法
蛋白質(zhì)是由許多氨基酸連接而成的高分子物質(zhì),分子量從數(shù)千至百萬。數(shù)以千計(jì)的蛋白質(zhì),按它們的功能可分成兩大類,一類是活性蛋白,包括酶、激素蛋白、受體蛋白、運(yùn)動(dòng)蛋白、運(yùn)輸和貯存蛋白、防御蛋白等等,另一類是非活性蛋白,如膠原蛋白、角蛋白等,不同的蛋白質(zhì)由于其結(jié)構(gòu)的差異,它們?nèi)芙舛纫哺鞑幌嗤?。大部分蛋白質(zhì)都可溶于水、稀鹽、稀酸或稀堿溶液,少數(shù)與脂類結(jié)合的蛋白質(zhì)則溶于有機(jī)溶劑乙醇、丙酮、丁醇等。這對(duì)選擇撮蛋白質(zhì)的溶劑具有重要意義。
(1)水溶液提?。河捎诘鞍踪|(zhì)大部分溶于水、稀酸和稀堿溶液,因此提取蛋白質(zhì)以水溶液為主,其中尤以稀鹽液和緩沖液對(duì)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性好,溶解度大,氫是zui常用的溶劑。應(yīng)注意下列幾點(diǎn):①鹽濃度,常用等滲溶液,尤以0.02~0.05mol/L磷酸鹽緩沖液或碳酸鹽緩沖液、0.15mol/L氯化鈉溶液應(yīng)用較多。如酵母脫氫酶以0.66mol/L磷酸氫二鈉溶液提取,6-磷酸葡萄糖脫氫酶以0.1mol/L碳酸氫鈉液提取,脫氧核糖核蛋白在低鹽溶液中溶解度小,就要用1mol/L以上的氯化鈉液提取,而某些脂肪酶,用水提取比低鹽溶液提取效果更好。②pH值的選擇對(duì)蛋白質(zhì)提取頗為重要,因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的溶解度和穩(wěn)定性與pH值關(guān)系很大。提取液的pH值首先要保證在蛋白質(zhì)穩(wěn)定的范疇內(nèi),通常在等電點(diǎn)的兩側(cè),堿性蛋白如細(xì)胞se素C和溶菌酶選在偏酸一側(cè),酸性蛋白如肌肉甘油醛-3-磷酸脫氫酶應(yīng)選在偏堿一側(cè)。③溫度:為防止活性蛋白變性、降解而失活,溫度通常選在5℃以下。對(duì)少數(shù)耐溫的蛋白質(zhì)和酶,可適當(dāng)提高溫度,使雜蛋白變性分離,有利于提純,如胃蛋白酶、酵母醇脫氫酶以及許多多肽激素可選擇37~50℃條件下提取,效果比低溫提取更好。
(2)有機(jī)溶劑提取:一些不溶于水、稀鹽、稀酸或稀堿溶液的蛋白質(zhì)和酶,常用不同比例的有機(jī)溶劑來提取。如用70%~80%乙醇提取麩蛋白;用60%~70%的酸性乙醇提取胰島素,既可抑制水解酶對(duì)胰島素的破壞,又可除去大量雜蛋白,用丁醇提取某些附于微粒體和線粒體的酶,一些與脂質(zhì)結(jié)合牢固的蛋白質(zhì)和酶以丁醇提取,效果較好。我國(guó)生化工作者曾用此法成功地提取了琥珀酸脫氫酶和堿性磷酸脂酶。丁醇提取法對(duì)pH及溫度的選擇范圍較廣(Ph3~10),溫度由零下2℃~40℃均可。

 

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