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小鼠單核細胞趨化蛋白elisa試劑盒銷售說明書
更新時間:2014-10-17   點擊次數(shù):853次

小鼠單核細胞趨化蛋白elisa試劑盒銷售說明書

檢測范圍: 96T
20ng/L-600ng/L

使用目的:
小鼠單核細胞趨化蛋白試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本單核細胞趨化蛋白-1( MCP-1)含量。

實驗原理
小鼠單核細胞趨化蛋白試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠胃動素(MTL)水平。用純化的小鼠單核細胞趨化蛋白-1( MCP-1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加小鼠單核細胞趨化蛋白-1( MCP-1),再與HRP標記的單核細胞趨化蛋白-1( MCP-1)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的單核細胞趨化蛋白-1( MCP-1)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠單核細胞趨化蛋白-1( MCP-1)濃度。 

試劑盒組成 
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品(1200ng/L) 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個

標本要求 
1.小鼠單核細胞趨化蛋白標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟
標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
600ng/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
300ng/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
150ng/L 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
75ng/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
37.5ng/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

加樣:小鼠單核細胞趨化蛋白分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
溫育:操作同3。
洗滌:操作同5。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

 

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